前期无菌准备工作：

⑴提早一个钟头左右时间开启微生物实验室紫外灯进行消毒灭菌处理

⑵工作人员的衣物和手，做好清洁卫生和消毒杀菌；

⑶把用来微生物培养基所需容器与接种的器具和中海培养基等做好灭菌处理；

⑷全部的无菌操作都需在酒精灯旁进行操作。

中海培养基配制：

⑴LB肉汤：肉汤粉三百三十克，葡萄糖五克，蒸馏水一千毫升；

⑵营养琼脂培养基：琼脂培养基粉三百克，葡萄糖五克，蒸馏水一千毫升。

倒平板步骤操作流程：

⑴培养皿经过灭菌处理后摆放在火苗旁的桌面上，右手拿配有中海培养基的锥形瓶，左手拿掉棉塞，右手拿锥形瓶，使瓶口快速进行火苗；

⑵中海生物技术人员的左手把培养皿开启一条稍超过瓶口的间隙，右手将锥形瓶中的十至二十毫升中'海培养基倒进培养皿，左手马上盖好培养皿的皿盖后慢慢混合均匀。

⑶大约等差不多五至十分钟平板冷却凝固后，把平板倒过来摆放，使皿底在上，皿盖在下。

平板划线流程操作：

⑴将接种环放置在火苗上灼烧，一直到接种环烧红；

⑵在火苗旁冷却后接种环，并开启内盛菌液的试管的棉塞；

⑶将试管口经过火苗。中海生物www.meibean.com培养基厂家

⑷将已冷却后的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；

⑸将试管口经过火苗，并塞上棉塞；

⑹左手将皿盖开启一个间隙，右手将沾有菌种的接种环快速渗入平板内，划三至五条平行线，盖紧皿盖。要注意不能刮破培养基。

⑺灼烧接种环待其冷却后，从第一区域划线的尾端逐渐往第二区域内划线。多次重复上述操作流程，在三区域内划线。留意不能将最后一区域的划线与第一区连在一起。

⑻将平板倒放，放进培养箱中培养。

进行稀释操作流程：

⑴将各自内盛九毫升水的六支试管灭菌处理，并按10^6的顺序编号。

⑵用移液管抽取1毫升培养的菌液，灌入十倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水完全混合均匀。

⑶从十倍稀释的试管中抽取一毫升稀释液，灌入一百零二倍稀释的试管中，多次重复第2步的混合均匀进行操作。依次类推直达成功完成最后一个试管的稀释。注：移液管必须进行灭菌处理。进行操作时，试管口和移液管应在离火苗的一至二厘米处。

涂布平板操作流程：

⑴将涂布器浸在内盛酒精的烧杯中；

⑵取不超过0.1毫升少许菌液，滴加到中.海培养基外表面；

⑶将沾有少许酒精的涂布器在火苗上点燃，待酒精烧尽后，冷却后八至十秒；

⑷用涂布器将菌液均衡地涂布在培养基外表。涂布时可旋转培养皿，使涂布均衡。

需要注意事项：

⑴将涂布器尾端浸在内盛70%浓度酒精的烧杯中。取出来时要让多出的酒精在烧杯中滴尽，接着将沾有少许酒精的涂布器在火苗上燃烧。

⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能将温度过高的涂布器放置在存放酒精的烧杯中，防止燃烧其中的酒精。

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